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ln this work , we aimed to develop novel tools for the analysis of function and biogenesis of micrq-RNAs . Since we worked on two different methods, this work is divided in two parts.The aim of the first part was to develop a quick, reliable and cheap method to synthesize and purify precursor-microRNAs (premiR). Our method is based on in vitro transcription by T7 RNA polymerase. To overcome limitations of this technique, we added special RNA structures (ribozymes) capable of cleaving the transcript in an autocatalytic manner and leaving only the desired premiR sequence. To be able to extract the ribozymes, which could interfere with further processing of the premiR, we added a second RNA structure (aptamer) capable of binding to an affinity matrix. Eventually, we were able to synthesize and purify different premiRs that could be cleaved by the enzyme Dicer.The second part of this thesis focused on the inhibition of micro-RNA. There already are different methods to inhibit them but they all suffer serious limitations. That's why we attempted to improve the method of the so-called micro-RNA sponges. These are transcr ipt containing many binding sites for a miR. These transcripts act as compet itive inhibitors by trapping the micro-RNA. However, these sponges are far from efficient due to the destabilization caused by the binding of the micro-RNA. This destabilization is caused by the decapping and deadenylation of the transcript. We therefore proposed that, if we were able to produce circular sponges these would probably be more stable and hopefully more efficient. To explore this hypothesis, we first tried to find a model allowing us to generate circular miRNA sponges. Three different experimental were generated and assessed for their capacity to generate circular sponge transcripts. Furthermore, we tested whether the best of the experimental systems could be integrated into a lentiviral vector that would allow us to infect a variety of cells.Future work will have to demonstrate whether the generated circular sponges are more efficient inhibitors of miRNA function when compared to their linear counterparts . Au cours de ce mémoire, nous nous sommes intéressés au développement de nouveaux outils permettant l'analyse de la fonction et de la biogenèse des micro-ARNs . Dans cette optique, nous avons exploré deux méthodes différentes. Par conséquent , ce travail est scindé en deux parties.Le but de la première partie de ce mémoire était le développement d'une méthode de synthèse de micro-RNA précurseur (premiR). A insi, nous avons mis au point une méthode sur base de la transcription in vitro. Afin d'éviter certaines contraintes du point de vue de la séquence , nous avons flanqué le premiR d'une séquence ARN particulière (ribozyme) capable de cliver tout nucléotides supplémenta ire éventuels. Ensuite, afin d'être capable d'extraire ces séquences contaminantes, nous avons complémenté les ribozymes d'une seconde structure ARN (aptamères) capable de se lier avec une matrice d'affinité. Suite à la transcription in vitro et la purification du premiR, nous avons analysé le résultat par électrophorèse en gel de polyacrylamide dénaturant et « Northern Blot ». Nous avons pu démontrer l'efficacité de notre méthode à produire des premiR, les purifier ainsi que montrer l'utilité de ceux-ci comme outils pour étudier le clivage catalysé par Dicer.La seconde partie de ce mémoire se penche sur le développement d'une nouvelle méthode d'inhibition des miRs. En effet, malgré l'existence d'outils permettant leur inhibition, ceux-ci souffrent encore de nombreux désavantages . Nous avons donc tenté d'améliorer la méthode d'éponges à miR décr ite précédemment dans la littérature. Cependant, afin d'améliorer leur stabilité, nous avec tenté de produire des éponges circulaires. Pour cela nous avons complémenté notre construction de signaux d'épissage et de séquences répétitives nécessaires à la circularisation comme décrit dans la littérature. Après transfection de nos constructions plasmidiques, nous avons mesuré les niveaux d'ARN circulaires et linéaires à l'aide de PCR quantitative . Ensuite nous avons développé des vecteurs lentiviraux permettant l'intégration stable de ces constructions. De futures études devront démonter si le système ainsi développé présente des améliorations par rapport aux autres techniques.

MicroRNAs --- RNA Splicing --- RNA --- Transcription, Genetic

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« À l'heure où nous écrivons ces mots, une véritable course contre la montre est en train de se jouer tout autour du globe, dont les principaux protagonistes sont, d'un côté, le Sars-CoV-2 et, de l'autre, les chercheurs - et tout spécialement ceux spécialistes des vaccins à ARN messager. L'histoire de ces vaccins inédits est avant tout européenne, grâce aux travaux décisifs de chercheurs allemands et français, commencés dès 1993 et poursuivis jusqu'à nos jours. Contre la pensée unique ambiante, ces chercheurs ont en effet imposé un nouveau concept thérapeutique, en définissant les clés biotechnologiques qui allaient ouvrir la voie à la préparation de l'ARN messager thérapeutique dans la lutte contre les cancers et les infections virales. Toutefois, revues scientifiques et leaders d'opinion américains taisent cette vérité. En s'appuyant sur le succès incontestable des vaccins anti-Covid mis sur le marché par Pfizer et Moderna, ils donnent une vision clairement déformée de l'histoire de ces nouveaux vaccins. Face à cette manipulation - voire cette usurpation - il est grand temps que les Européens rétablissent la vérité, en rappelant le rôle essentiel qui a été le leur dans la mise au point des vaccins à ARN messager. C'est cela, et bien d'autres choses encore, que ce livre s'attache à nous faire découvrir, et toujours à partir de sources objectives. Parsemé de données captivantes et pimenté de dessins humoristiques, cet ouvrage s'adresse aux scientifiques comme au grand public. »--Quatrième de couverture.

RNA, Messenger --- history.

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RNA, Messenger --- Thyroglobulin

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La biologie de 1986 diffère totalement de celle d'il y a seulement dix ans. D'une part, de nouvelles techniques de recherche ont banalisé nombre d'expériences qui étaient autrefois hors de portée, même du biologiste le plus habile; d'autre part, la nouvelle biologie moléculaire a fait bien plus qu'étendre la gamme des techniques de laboratoire: elle a très rapidement établi les bases de l'industrie biotechnologique et, mieux encore, elle a changé notre compréhension des êtres vivants, de la bactérie à l'être humain.

ADN --- DNA --- ARN --- RNA --- proteins --- Carbohydrates --- Lipids --- genes --- DNA. --- RNA.

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Disease. --- DNA. --- Lysogeny --- Rna --- Virus