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Bacteria --- Viruses --- Microbiology --- Yeasts

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Ce travail se situe dans le cadre du développement de nouveaux produits que la société Unda désire commercialiser. Il s’agit de comprimés à base de levures Saccaromyces cerevisiae hyper-productrices de certaines protéines, notées ultérieurement protéines X. La production de ces protéines X peut être induite par les conditions de culture (composition du milieu de culture, température, pH,…). Leur excrétion ou leur accumulation dans la levure peuvent également être contrôlées.
Les développements laboratoires et pilote ont déjà fait l’objet d’études préalable et se résument essentiellement en quatre points :
1. la sélection d’une souche de levure hyper-productrices ; cette souche n’a pas été manipulé génétiquement,
2. l’étude au stade laboratoire des conditions de fermentation afin d’optimiser la production des protéines X et leur accumulation dans la levure,
3. les essais de scale-up pour le passage de la fermentation du stade laboratoire au stade pilote,
4. la mise au point des étapes post-fermentation c’est-à-dire la séparation des cellules de levure, leur lavage puis leur séchage.
Les étapes 1 et 2 ont été réalisées dans le cadre du laboratoire de Microbiologie de la Division recherche et développement de la Société Unda tandis que les étapes 3 et 4 ont été réalisées dans le cadre d’une convention de collaboration avec le Centre wallon de biologie industrielle (CWBI) et l’équipe du professeur Thonart de la Faculté agronomique de l’Etat de Gembloux.
L’étude de la formulation a été réalisée au sein de la Division recherche et développement de la société Unda. Les étapes de mélange et de compression ont été mises au point dans le cadre de la Division Production.
Responsable du « Projet levure » depuis le stade de recherche en laboratoire jusqu’au stade de développement actuel, nous avons naturellement été pressentie pour réaliser l’étude approfondie d’une nouvelle ligne de fabrication et plus particulièrement pour concevoir la future unité de production de levures séchées de la société Unda. En effet, l’usine de production actuelle ne pourrait pas accueillir cette installation d’une part par manque de place et d’autre part parce qu’il est préférable que la production et la manipulation du matériel biologique, en particulier de levures, soient effectuées dans un bâtiment strictement réservé à cet usage, selon les prescriptions du Guide CEE des bonnes pratiques de fabrication des médicaments.
Le mélange et la compression seront quant à elles réalisées par campagnes dans l’actuelle usine de production et ne font pas l’objet de ce travail.
La conception d’une unité de production n’a de sens que si on définit correctement l’ensemble du procédé. Il s’agit d’une part de déterminer les différentes étapes de production, de spécifier les machines de production, de définir les locaux, d’en donner les caractéristiques et d’autre part de dimensionner l’ensemble en fonction des quantités à produire. Ces informations permettront de préciser la circulation des produits et des personnes.
Ce travail est divisé en plusieurs parties. Dans le premier chapitre, nous définirons le principe de la production proprement dite. Dans le second chapitre, nous traiterons le problème d’un point de vue ingénierie biochimique ce qui nous permettra de choisir et de dimensionner les machines et surtout de préciser l’infrastructure nécessaire. Dans le chapitre suivant, nous ajouterons les éléments relatifs à une production dans un cadre pharmaceutique. L’ensemble de ces données devrait nous permettre d’aboutir à la conception du bâtiment, à l’aménagement des locaux et au choix définitif de l’agencement des machines. Enfin, la dernière partie sera consacrée aux conclusions et à une discussion des perspectives d’évolution de l’installation.
Nous désirons souligner le fait que le présent travail n’a pas la prétention de constituer la cahier des charges en vue de la réalisation de l’unité de production. Il se borne à définir, avec le plus de précision possible, la philosophie du procédé et à mettre l’accent sur les caractéristiques techniques spécifiques dont il faudra tenir compte lors de l’élaboration du cahier des charges.

Drug Industry --- Yeasts

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Suite à l’hybridation d’un Zoo-blot avec une sonde P1A de souris, nous avons tenté d’isoler l’équivalent levure du gène P1A de souris. Nous avons réussi à cloner quatre fragments par la sonde.
Nous avons tout d’abord construit une banque d’ADN génomique de levure dans le vecteur pBuescript SK-. Nous avons isolé et séquencé deux fragments EcoRi (0,6 et 0,8 kb) qui hybridaient avec la sonde. Le fragment de 600 bases est identique au gène de levure RAD6. Ce gène est impliqué dans la sporulationet dans la réparation des dommages causés à l’ADN par les rayonnements UV. La séquence du fragment de 800 bases n’est pas connue. La comparaison des séquences avec celle de l’ADN complémentaire de P1A montre que le gène RAD6 possède 46 % d’identité avec P1A. La séquence du fragment de 0,8 kb présente une faible (17 %) homologie avec l’ADNc de P1A. La séquence protéique de RAD6 a été comparée avec la séquence de la protéine P1A : RAD6 est identique à 14 % avec P1A.
Afin d’isoler les fragments de plus grande taille ( de 4 à 7,5 kb) nous avons alors construit une banque enrichie d’ADN génomique de levure dans le bactériophage λgt10. Cette banque nous a permis de cloner deux fragments EcoRI de 4,6 à 5,2 kb. Leur séquence a été déterminée et comparée aux séquences présentes dans la banque de données Genbank. Ces deux séquences ne sont pas connues.
Nous les avons comparées avec la séquence de l’ADN complémentaire de P1A. la séquence du fragment de 4,6 kb montre 40 % avec celle de P1A. Le fragment de 5,2 kb ne possède que 34 % d’identité avec P1A.
Nous avons découvert une ORF codant pour une protéine de 191 acides aminés dans le fragment de 4,6 kb. Sa séquence protéique possède 72 % d’identité avec la protéine de levure SIS2. Cette protéine interviendrait dans la stimulation des cyclines de la phase G1.
Une analyse de structures des trois protéines par la méthode HCA suggère qu’aucune de celles-ci ne possède une structure comparable à celle de la protéine de souris P1A.

Yeasts --- T-Lymphocytes --- Antigens, Neoplasm --- Medical Laboratory Science

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Yeast fungi. --- Fungi --- Yeasts --- Cell Membrane. --- 582.282.23 --- 576.314 --- 576.314 Cell membrane --- Cell membrane --- 582.282.23 Saccharomycetineae. Yeasts. Brettanomyces --- Saccharomycetineae. Yeasts. Brettanomyces --- Cytoplasmic Membrane --- Plasma Membrane --- Cell Membranes --- Cytoplasmic Membranes --- Membrane, Cell --- Membrane, Cytoplasmic --- Membrane, Plasma --- Membranes, Cell --- Membranes, Cytoplasmic --- Membranes, Plasma --- Plasma Membranes --- Membranes --- Basidiomycetes --- Blastomycetes --- Endomycetales --- Cytology. --- cytology. --- Yeast fungi --- Cell Membrane --- Cytology --- cytology --- Fungi - Cytology --- Yeasts - cytology

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Fermentation --- Pasteurization --- Fermented foods --- History --- Fermented products --- Alcoholic beverages --- Yeasts --- Cheese --- Pain. --- Bread --- Cuisine --- Fermentation. --- Histoire --- Cuisine - Histoire