Abstract | Keywords | Export | Availability | Bookmark

Choose an application

• Reference Manager
• EndNote
• RefWorks (Direct export to RefWorks)

The C-terminus of the PDGF receptor is known for its inhibiting activity on the activation of the kinase domain. It actually contains an inhibiting PE motif and a NHERF bonding site. NHERF is an adaptor that might act as a tumor suppressor and limit PDGF receptor’s signaling.
The main goal of this work to establish the role of the C-terminus in the regulation of the activation of two chimeric proteins created by the fusion of the PDGFR receptor with other proteins, TEL/PDGFR β and FIO1L1/PDFRE α. These two proteins are involved in leukemia.
To address this issue, we performed a co-immunoprecipitation against NHERF. The experiment shows that TEL/PDGFR β is able to bind NHERF with high affinity. By creating TEL/PDGFR β mutants with a truncated C-terminus, we managed to suppress NHERF binding to the protein. The CT 29 and CT 75 mutants in which the 29 and 75 last amino acids have been deleted did not interact with NHERF. In addition the CT 75 mutants has lost the PE motif. The L1160A mutant has a much lowered affinity towards NHERF.
When trying to characterize the different mutants in terms of proliferation by thymidine incorporation or counting assay, it appears that Ba/F3 cells expressing the CT 75 mutant have much higher ability to proliferate compared to the other mutants or even the original TEL/PDGFR β protein in the absence of IL-3
To try to explain this difference, we performed a signaling assay. It seems that TEL/PDGFR β and all the mutants we have created are able to induce STATs activation when expressed. This pathways is only activated in Ba/F3 cells when stimulated with IL-3. This result has been confirmed by luciferase assay. All the different mutants were able to activate the same signaling pathway. Nevertheless, the CT 75 mutant, again, seemed to give a better activation of the signaling pathway, more particularly in the activation of the MAP kinase pathway. This might explain why cells expressing this mutant have higher proliferation rate than those expressing the other mutants or the original TEL/PDGFR β.
To conclude, TEL/PDGFR β is actually able to bind NHREF. This binding can be altered by truncation of the C-terminal end. It also appears that the C-terminus might play a role in the activation of TEL/PDGFR β; its deletion might give a proliferate advantage due to a better activation of the protein L’extrémité C-terminale du récepteur du PDGF est connue pour son action inhibitrice sur l’activation de la protéine. En effet, elle comporte un motif inhibiteur PE et un motif de liaison à NHERD, une protéine adaptatrice qui pourrait être un suppresseur de tumeurs et qui semble jouer un rôle négatif sur la signalisation du récepteur.
L’objectif principal de ce mémoire était de déterminer le rôle de celle extrémité C-terminale dans la régulation de l’activité de deux protéines chimériques issues de mutations du récepteur de PDGF, TEL/PDGFR β et FIP1L1/PDGFR α. Ces deux protéines sont impliquées dans des leucémies.
Nous avons tout d’abord montré que TEL-/PDGFR β lie NHERF avec une grande affinité. FIP1L1/PDGFR alpha semble capable de lier NHERF mais ces observations doivent être confirmées.
En créant des mutants de TEL/PDGFR β possédant une extrémité C-terminale tronquée, on parvient à diminuer voir même supprimer la liaison à NHERF. Les mutants CT 29 et CT 75, dont les 29 et les 75 derniers acides aminés sont délétés, n’interagissent pas avec NHERF. Le mutant CT75 a, en outre, perdu le motif inhibiteur PE. Le mutant L1160A présente une affinité fortement diminuée pour NHERF.
Lorsque l’on cherche à caractériser les différents mutants en terme de prolifération grâce à une incorporation de thymidine ou à un comptage des cellules, il apparaît que les cellules Ba/F3 exprimant le mutant CT 75 possèdent une plus grande capacité à proliférer que les autres mutants et que la protéine TEL/PDGFR β intacte en absence d’IL-3.
Pour essayer d’expliquer cette différence, nous avons réalisés des tests de signalisation. Il semble aussi que TEL/PDGFR β et ses mutants soient capables d’activer la voie de STAT, voie qui n’est pas activée par le récepteur du PDGF dans les Ba/F3 mais qui est activée lorsqu’elles sont stimulées à l’IL-3. Ce résultat a été confirmée par un test de luciférase. Les mutants sont capables d’activer les mêmes voies de signalisation, plus particulièrement la voie des MAP kinases. Ces données pourraient en partie expliquer l’avantage prolifératif des cellules exprimant ce mutant.
En conclusion, TEL/PDGFR β est capable de lier NHERF, Cette liaison peut être compromise par la troncature de l’extrémité C-terminale de la protéine. Il semblerait également que le motif inhibiteur PE joue un rôle ans l’activation de la protéine TEL/PDGFR β et que sa suppression conférerait un avantage prolifératif

C-terminal binding protein --- Protein Transport --- Platelet-Derived Growth Factor --- TEL-PDGFRbeta fusion protein, human --- ETS translocation variant 6 protein