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Le travail est divisé en deux parties.
1. Etude des isoformes longues et courtes de l’isoenzyme M
Ainsi qu’il est décrit plus haut, 2 isoformes de l’isoenzyme M peuvent exister puisque le cDNA correspondant possède 2 sites d’initiation pour la traduction. La première partie du travail sera consavrée à la purification de ces deux isoformes recombinantes surexprimées dans E. coli, ainsi qu’à la caractérisation de leurs propriétés cinétiques. En comparant ces données avec celles obtenues avec de la PFK-2/FBPase-2 purifiée à partir de muscle de rat on espère pouvoir déterminer quelle isoforme est exprimée dans le muscle.
2. Etude des propriétés des mutants Asp-152-Ala et Clu-157-Ala
La deuxième partie sera consacrée à l’étude de mutations effectuées dans le site actif de la PFK-2. D’après la similitude entre le site actif de la PFK-1 d’E. Coli et celui de la PFK-2/FBPase-2 de rat.
E. Coli PFK1 (122) Leu Pro Gly Thr Ile Asp Asn Asp Ile (130)
Foie PFK2 (155- Phe Ile Glu Ser Ile Cys Asn Asp Pro (163)
nous constatons que Asp-162 et Glu-157 pourraient être importants dans la catalyse en agissant comme Asp-127 de la PFK-1 d’E. Coli c’est –à-dire en ayant un rôle de catalyse basique. Asp-162 et Glu-157 ont été mutés en Ala et les propriétés des mutants ont été étudiées. Si ces résidus sont essentiels à la catalyse on s’attend à trouver une perte quasi complète de l’activité PFK-2 dans les mutants.
Le travail de ce mémoire consistera donc à purifier ces différents isoenzymes et à en caractériser les propriétés cinétiques afin de proposer une relation structure/activité de la PFK-2/FBPase-2

Phosphofructokinase-2 --- Fructose-Biphosphatase --- Mutation --- Medical Laboratory Science