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Nous avons étudié le rôle de la séquence comprise entre les nucléotides -190 et +1 du promoteur du gène humain de l’hormone de croissance qui contient les sites de liaison des facteurs GHF-1/Pit-1 et Sp1 sur l’activité de ce promoteur. Pour définir le rôle de ces séquences, nous avons construit les plasmides phGH128, 149, 160 et 190Luc et correspondant à la longueur en pb du promoteur à partir du site cap 1 présent dans la construction devant un gène rapporteur luciférase. Ces plasmides ont ensuite été transfectés dans des cellules GC et des cellules HeLa. Nous avons mis en évidence que l’addition de la séquence -149 à -128 stimule fortement la transcription dans les cellules GC. Nous attribuons cet effet à la fixation du facteur Sp1, un puissant activateur de la transcription comme l’ont démontré des expériences de transfection dans les cellules HeLa. Or des expériences de « footprinting » à la DNAse I avec des cellules GC ont montré que la fixation de GHF-1/Pit-1 et Sp1 est mutuellement exclusive et en faveur de GHF-1/Pit-1. Pour expliquer la stimulation observée dans les cellules GC, nous avons émis l’hypothèse d’une titration du facteur GHF-1/Pit-1 par une partie des phGH dans les cellules transfectées et de la stimulation indépendante de la fraction des phGH encore disponibles par le facteur SP1 responsable de l’effet observé. Nous avons également mis en évidence une diminution du taux de transcription par la fixation d’un facteur inconnu sur la séquence -160 à -190 pour laquelle aucun site de liaison n’a encore pu être démontré.
Nous avons également recherché un GRE (Glucocorticoid responsive Element) potentiel entre les deux sites de liaison du facteur GHF-1/Pit-1 sur phGH en réalisant des expériences de transfection de constructions contenant cette région dans des cellules GC traitées ensuite à la dexaméthasone, un analogue des glucocorticoïdes. Nous n’avons observé aucun effet de celle-ci probablement parce que le site GRE contient une base supplémentaire dans la séquence de 3 pb située entre les deux demi-palindromes de liaison. L’augmentation de cet espacement empêcherait la liaison du récepteur des glucocorticoïdes et serait responsable de l’absence d’effet transcriptionnel de la déxaméthasone

Glucocorticoids --- Transcription, Genetic --- Growth Substances --- Medical Laboratory Science --- Sp1 Transcription Factor