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Dictionary of DNA and genome technology
Author:
ISBN: 9781118447574 9781118447581 1785393251 Year: 2012 Publisher: Chichester, West Sussex : John Wiley & Sons,

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Genetics : analysis of genes and genomes
Authors: ---
ISBN: 9781449635893 9781449626105 9781449635961 Year: 2012 Publisher: Burlington : Jones and Bartlett Publishers,

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Génotypage HLA de classe II
Authors: --- ---
Year: 1995 Publisher: Bruxelles : UCL,

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Le système HLA (human leucocyte antigens), qui signe le complexe majeur d’histocompatibilité humain, occupe une place centrale dans la défense de l’organisme vis-à-vis des agents infectieux, mais aussi dans les phénomènes de rejet de greffes d’organes. Les premières molécules HLA identifiées, les molécules HLA-A, -B et –C (classe I) et les molécules HLA-DR, -DQ, et –DP (classe II), sont des glycoprotéines de surface, capables de fixer et de présenter des peptides antigéniques aux lymphocytes T et d’enclencher des réactions immunitaires. Elles sont très polymorphes et constituent les antigènes majeurs d’histocompatibilité. Depuis quelques années, les techniques sérologiques qui permettent de les caractériser tendent a être remplacées par des techniques de biologie moléculaire, basées sur la PCR (polymerase chain reaction). Celles-ci ont permis, jusqu’à présent, de décupler le nombre d’allèles HLA connus. En fait, chaque spécificité sérologique recouvre plusieurs allèles. La redéfinition du polymorphisme HLA impose donc de réévaluer la notion de compatibilité tissulaire entre donneur et receveur.
Dans la première partie de ce travail, nous avons mis au point et comparé le typage des molécules HLA de classe II par deux techniques de biologie moléculaire. Nous avons montré qu’aucune de ces deux techniques de haute résolution ne permet d’identifier tous les allèles HLA et que toutes deux fournissent un grand pourcentage de typages ambigus. Pour obtenir des résultats non ambigus, l’association des deux techniques s’avère souvent efficace. Grâce à ces techniques combinées, nous avons détecté plusieurs allèles et haplotypes rares et évaluer leur fréquence, l’emploi de techniques de hautes résolution, ainsi que leur mise à jour régulière, s’imposent. Ces résultats illustrent également que le regroupement des allèles en groupes d’allèles de même spécificité sérologique soulève de nombreuses questions quant à la signification physiologique de cette classification.
dans la seconde partie du travail, nous avons étudié l’intérêt des techniques de typage de haute résolution, dans le cadre des greffes de moëlle et de reins. Nous avons typé, de façon prospective, des candidats receveurs de moëlle et leurs donneurs non apparentés et, de façon rétrospective, des receveurs de reins et leurs donneurs cadavres. Nous avons constaté qu’il s’avère virtuellement impossible d’obtenir une compatibilité tissulaire totale entre donneur et receveur, aussi bien pour les greffes de moëlle que pour les greffes de reins. De plus, pour les greffes de reins, les phénotypages ont montré que seuls 8 % des patients présentaient effectivement une identité HLA-DR avec leur donneur, alors que ce taux était évalué à 50% sur base des typages sérologiques.
Les données de la littérature montrent que, dans l’état actuel des connaissances, même de petites variations entre allèles HLA peuvent se révéler importantes. En effet, les expériences in vitro montrent que des molécules HLA codées par des allèles très proches peuvent différer dans leur capacité de fixation et de présentation des peptides. Les données cliniques concernant les greffés médullaires et les greffés rénaux corroborent ces résultats puisqu’elles montrent que des incompatibilités entre les allèles HLA appartenant au même groupe sérologique ou à des groupes différents, peuvent être à l’origine de rejet ou de réaction du greffon contre l’hôte.
Idéalement, donneur et receveur devraient présenter une identité HLA complète. Cependant, le polymorphisme HLA rend cet objectif impossible à atteindre en pratique. De plus, les différentes HLA ne sont pas les seuls facteurs intervenant dans les phénomènes de rejet. Des antigènes mineurs ainsi que des facteurs non spécifiques tels que de cytokines et des molécules d’adhésion y jouent un rôle très important.
Bien que les bénéfices liés à la compatibilité HLA soient limités, le recours aux techniques de biologie moléculaire pour typer tous les antigènes HLA avec un haut degré de précision paraît nécessaire. En effet, plusieurs études tendent à montrer que la compatibilité HLA doit se situer au niveau allélique pour améliorer statistiquement le décours de greffes. De plus, des typages précis permettraient de réaliser des greffes en connaissant la nature exacte des incompatibilités présentes. De tels typages devraient également permettre des études rétrospectives, incluant de grandes séries de greffes. Ces études devraient aboutir à la caractérisation précise des incompatibilités et à l’évaluation de leur impact en transplantation. Ainsi, on pourrait, peut-être, identifier des incompatibilités particulièrement immunogènes et, aussi, mieux comprendre les phénomènes de rejet et de tolérance.


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Mise au point d'une variante de la technique "nick translation" pour la détection de cassures de l'ADN induites par des agents génotoxiques
Authors: --- ---
Year: 1994 Publisher: Bruxelles : UCL,

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Ce travail s’inscrit dans l’optique d’évaluer l’applicabilité de la technique « nick translation » aux lymphocytes du sang pour le bio monitoring de population exposées à divers agents génotoxiques.
La technique « Nick translation » est basée sur les propriétés d’une enzyme : la DNA polymérase I (extraite d’E. Coli). Lorsque celle-ci est en présence d’ADN présentant des cassures de brins à extrémité 3’-OH (« Nick »), elle a la particularité d’enlever les nucléotides de cet ADN et de les remplacer par d’autre fournis par les nucléotides triphosphates intra cellulaires (« Nick translation »). Le principe consiste à introduire des déoxynucléotides triphosphates radio marqués, ainsi que la DNA polymérase I dans des cellules dont on veut évaluer l’intégrité de l’ADN. Après rinçage de l’excédent, la radioactivité restantes est proportionnelle au nombre de « nicks » présents dans l’ADN.
Deux objectifs successifs ont été poursuivis dans ce travail :
- la mise au point de l’incorporation des déoxynucléotides triphosphates par le DNA polymérase I dans des cellules dont l’ADN a été exposé préalablement à la DNAase I (enzyme produisant des « nicks »).
- l’évaluation de la capacité de la technique à détecter des lésions de l’ADN dans des lymphocytes du sang périphérique suite à une exposition in vitro à un des trois agents génotoxiques suivants : les rayons γ, le méthanesulfonate d’éthyle ou le 7,8-diol 9,10-époxyde du benzo(a)pyrène.<>BR>En conclusion générale de cette première approche de la « nick translation », il semble qu’elle soit difficilement adaptable au bio monitoring. Ceci est dû :
- à son manque de sensibilité
- à la nécessité de bien connaître les agents génotoxiques (et leur effet sur l’incorporation de déoxynucléotides triphosphates par la polymérase) auxquels est exposée la population surveillée.
- à la spécificité de la lésion qui est détectée par la technique.
Son application à l’in vitro sur des lignées cellulaires éternelles paraît plus adéquate.

Working with DNA
Author:
ISBN: 9780415374644 Year: 2007 Publisher: New York (N.Y.) : Taylor and Francis,

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Genetic analysis : an integrated approach
Authors: ---
ISBN: 9781292092362 Year: 2016 Publisher: Boston : Pearson,

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Techniques for the genetic analysis of brain and behavior : focus on the mouse
Authors: --- ---
ISBN: 0444812490 0444896821 Year: 1992 Volume: 8 Publisher: Amsterdam London New York Elsevier

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Molecular genetics of yeast : a practical approach
Author:
ISBN: 0199634297 0199634300 Year: 1994 Volume: 141 Publisher: Oxford : IRL Press at Oxford University Press,

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DNA technology: the awesome skill
Author:
ISBN: 0120489201 9780120489206 Year: 2001 Publisher: San Diego Harcourt/Academic Press

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DNA Technology, Second Edition, is a survey of biotechnology written to enlighten readers about the breakthroughs made possible by the science and technologies associated with current DNA research. Ed Alcamo gives the educated layperson a survey of DNA by presenting a brief history of genetics, a clear outline of techniques that are in use, and indications of breakthroughs in cloning and other DNA advances. Appropriate for a wide range of courses for non-biology majors, including a DNA for Lawyers course or allied health and nursing courses. * An introductory treatment of aspects of DNA technology written to enlighten the reader about the breakthroughs made possible by the science and technologies associated with DNA * Emphasizes the practical implications and applications of the new genetic technologies; readers will come away saying, "So that's what DNA technology is all about!" * Helps students, business people, lawyers, and jurists gain more confidence in their ability to to understand and appreciate DNA technology and human genetics * Persons with genetic diseases will gain a clearer understanding of their afflictions and understand the bases for possible cures * Agriculturists will have insight into the genetic basis for gene-altered plants and animals * The general public will better appreciate the nature and reasons for the Human Genome Project now in progress.

Medical cytogenetics
Author:
ISBN: 0824719999 Year: 2000 Publisher: New York, NY ; Basel ; Hong Kong : Marcel Dekker,

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